月示蛋白胨是一種重要的微生物培養基原料,在微生物學研究和生物發酵領域應用廣泛。其是混合酶消化組織蛋白,是用精蛋白為基質,經特殊水解提取制備的干燥粉末,營養豐富,富含大量高分子質量多肽、游離氨基酸和生長促進因子,可做多種培養基的基礎材料。適宜于細菌產毒素培養和營養要求苛刻的微生物培養。蛋白胨是將肉、酪素或明膠用酸或蛋白酶水解后干燥而成的外觀呈淡黃色的粉劑,具有肉香的特殊氣息。蛋白質經酸、堿或蛋白酶分解后也可形成蛋白胨。
月示蛋白胨其使用方法需結合培養基的配制流程進行,以下是詳細步驟:
1、計算與稱量
根據目標微生物的營養需求,按配方比例計算月示蛋白胨的用量(如每升培養基添加10-20g)。
使用潔凈的稱量工具(如電子天平、牛角匙)快速稱取蛋白胨,避免長時間暴露吸濕。若需與其他成分(如牛肉膏、NaCl)混合,需按順序依次稱取,并防止交叉污染。
2、溶解與混合
將稱取的蛋白胨加入適量蒸餾水或去離子水中,用玻璃棒攪拌至初步溶解。
若配方含其他成分(如葡萄糖、瓊脂),需分步溶解:先溶解蛋白胨等易溶物質,再加入難溶成分(如瓊脂需加熱溶解),最后補足水量至所需體積。
3、調節pH值
用精密pH試紙或酸度計測量溶液原始pH值。
若pH偏低,逐滴加入1mol/L NaOH溶液;若偏高,則加入1mol/L HCl溶液,邊加邊攪拌并實時監測pH,直至達到目標值(如7.2-7.6)。
注意:避免pH調節過頭,否則需回調,可能影響培養基離子濃度。
4、過濾(可選)
若培養基需高度透明(如用于觀察菌落形態),可趁熱用濾紙或多層紗布過濾,去除雜質。
普通實驗可省略此步驟。
5、分裝與包扎
液體培養基:分裝至試管或三角瓶,裝量不超過容器容積的1/2(試管裝至1/4高度,便于搖勻)。
固體培養基:分裝后加入瓊脂(1.5%-2%),加熱溶化后分裝,滅菌后冷卻凝固成斜面或平板。
包扎:試管口塞棉塞(或泡沫塑料塞),外包牛皮紙并用麻繩扎緊;三角瓶同樣包扎,標注培養基名稱、配制日期。
6、滅菌
采用高壓蒸汽滅菌法:121℃(0.103MPa)滅菌15-20分鐘。
特殊情況:若培養基含葡萄糖等易分解成分,可分開滅菌(蛋白胨溶液與葡萄糖溶液分別滅菌后混合),或在中性pH條件下滅菌再調pH。
7、使用與儲存
使用前:檢查培養基是否渾濁、有無污染(如長菌斑)。
使用中:無菌操作下傾注平板或接種微生物,按目標條件培養(如35℃、18-24小時)。
儲存:未滅菌的培養基需冷藏(2-8℃);滅菌后培養基若未及時使用,應冷藏保存并在1周內用完。
